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用水浴鍋做質粒DNA提取的實驗方法

更新時間:2017-09-14  |  點擊率:2754

實驗方法原理 

質粒多為一些雙鏈、環狀的DNA分子,是獨立于細菌染色體之外進行復制和遺傳的輔助性遺傳單位。質粒是進行分子生物學實驗操作,進行遺傳工程改良物種等工作時zui主要的DNA載體。

提取質粒的基本步驟分為三步:

①細菌的培養和質粒的擴增

②細菌菌體的裂解

③質粒DNA的純化

實驗材料        

大腸桿菌

試劑、試劑盒ris-Hcl EDTA葡萄糖 NaOHKAacNaAc異丙醇溶菌酶酚LB培養基

儀器、耗材超凈工作臺 培養箱 搖床 恒溫水浴鍋臺式離心機取液器低溫冰箱冷凍真空干燥機電泳儀水平電泳槽紫外觀測儀

實驗步驟

一、材料與試劑準備

       1.  材料:大腸桿菌。

       2.  儀器:超凈工作臺,培養箱,搖床,恒溫水浴鍋,臺式離心機,取液器一套,低溫冰箱,冷凍真空干燥機,電泳儀,水平電泳槽,紫外觀測儀。

       3.  試劑:

      (1)Solution I :25 mM Tris-Hcl(pH7.4),10 mM EDTA(pH8.0),50 mM葡萄糖,高壓滅菌,4℃保存。

      (2)Solution II :0.2 M NaOH, 1%SDS 現配現用。

      (3)Solution III :5 N KAc pH4.8,高壓滅菌,4℃保存。

      (4)3 M NaAc pH5.2,高壓滅菌,4℃保存。

      (5)異丙醇,溶菌酶(8 mg/ml),無水乙醇,70%乙醇,LB培養基,電泳試劑。

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